产品描述

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不建议使用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。可用水云天BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：STP214）测定蛋白浓度。

运输与保存方式

冰袋运输、-20℃保存，有效期12个月。

使用说明

1.组织样品

a.在每1ml RIPA裂解液中加入10μl 100mM PMSF，混匀，冰上保存以备用。

b.称取100mg组织，剪刀充分剪碎，加入0.5-1ml RIPA裂解液，用玻璃匀浆器充分研磨组织。

c.将充分研磨后的组织匀浆液转移至1.5 ml EP管中，冰上裂解30分钟，离心机 4℃，15000g离心10min。

d.取上清液到新的EP管中，BCA法检测组织蛋白浓度。

e.分装保存于-80℃，避免反复冻融。

2.细胞样品

2.1贴壁细胞

a.在每1ml RIPA裂解液中加入10μl 100mM PMSF，混匀，冰上保存以备用。

b.用PBS缓冲溶液清洗细胞两次，每10⁷个细胞加入0.5ml RIPA裂解液，冰上裂解30分钟。

c.用干净的细胞刮刀用力地把蛋白刮取下来，并收集在1.5 ml EP管中，离心机 4℃，15000g离心10分钟。

d.取上清液到新的EP管中，BCA法检测细胞蛋白浓度。

e.分装保存于-80℃，避免反复冻融。

2.2悬浮细胞

a.将细胞及培养基移至离心管，离心收集细胞，用PBS缓冲溶液重悬清洗细胞两次，并转移至1.5ml EP管中，每10⁷个细胞加入0.5ml RIPA裂解液，冰上裂解30分钟。

b. 离心机4℃，15000g离心10分钟。

c.取上清液到新的EP管中，BCA法检测细胞蛋白浓度。

d.分装保存于-80℃，避免反复冻融。

注意事项

1．裂解液的量可根据实验做出具体调整。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果蛋白浓度过低，可以适当减少裂解液的用量。)

2．避免反复冻融，影响使用效果，可适当地将产品分装使用。

3．使用过程中所用到的试剂耗材都需要进行预冷处理，并在冰上或4℃进行操作。

4．本产品需自备PMSF，或蛋白酶磷酸酶抑制剂。

5．本产品仅为科研专用。

6．使用时，请穿实验服、佩戴一次性口罩、手套操作。