产品描述

细胞核蛋白和细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)是一种比较简单、方便的从细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。本试剂盒抽提得到的蛋白可用水云天BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：STP214）测定蛋白浓度，不建议使用 Bradford 法测定蛋白浓度。

产品包装

运输与保存方式

   冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

使用说明

细胞样品

1．将悬浮培养的细胞或已用刮刀刮下的贴壁细胞及培养基一同转移至离心管中，离心收集细胞，用PBS重悬离心洗涤细胞2次，吸尽上清。

2．按1:10的比例加入已添加PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A液（使PMSF的终浓度为1mM），如每20μl体积的细胞沉淀加入200μl抽提试剂A液，

3．振荡器最高速剧烈涡旋5秒，使细胞沉淀完全悬浮并分散开，冰水浴15分钟。

4．加入10μl细胞浆蛋白抽提试剂B，振荡器最高速剧烈涡旋5秒，冰水浴1分钟。

5．振荡器最高速剧烈涡旋5秒，4oC 12,000g离心5分钟。

6．立即吸取上清至新的EP管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可立即使用，也可-80℃冻存。(不可接触到沉淀。)

7．对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50μl已添加PMSF的细胞核蛋白抽提试剂（使PMSF的终浓度为1mM）。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)

8．振荡器最高速剧烈涡旋30秒，使细胞沉淀完全悬浮并分散开。冰水浴，每隔2分钟再涡旋30秒，共30分钟。

9．4oC 12,000g离心10分钟。

10．立即吸取上清至新的EP管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可立即使用，也可-80℃冻存。

新鲜组织样品

11．称取60mg新鲜组织，用剪刀充分剪碎，加入200μl按20:1的比例混合的抽提试剂A液和抽提试剂B液，加入PMSF使终浓度为1mM，用玻璃匀浆器充分研磨组织。

12．将充分研磨后的组织匀浆液转移至新的EP管中，冰上裂解15分钟，离心机 4℃，1500g离心5min。

13. 立即吸取上清至新的EP管中，即为抽提得到的部分细胞浆蛋白，吸上清时千万不要触及沉淀。

14．尽量吸尽上清，此时组织已充分匀浆，但仍有大部分细胞未破碎裂解，可当作细胞沉淀继续进行上述2-10步骤进行实验操作，抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。最终抽提得到的细胞浆蛋白可和步骤13抽提得到的部分细胞浆蛋白合并。

15．对于起始质量不足30mg的组织，2-10步骤的试剂用量均需减半。

注意事项

1．本产品需自备PMSF或蛋白酶磷酸酶抑制剂。PMSF需在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

2．本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果差。

3．使用过程中所用到的试剂耗材都需要进行预冷处理，并在冰上或4℃进行操作。

4．本产品仅为科研专用。

5．使用时，请穿实验服、佩戴一次性口罩、手套操作。