产品描述

细胞膜蛋白和细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)是一种比较简单、方便的从细胞或新鲜组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。本试剂盒抽提得到的蛋白可用水云天BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：STP214）测定蛋白浓度，不建议使用 Bradford 法测定蛋白浓度。

产品包装

运输与保存方式

      冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

使用说明

细胞样品

1.1．将悬浮培养的细胞或已用刮刀刮下的贴壁细胞及培养基一同转移至离心管中，4℃，600g离心5分钟收集细胞，用预冷PBS重悬离心洗涤细胞2次，尽量吸除上清。（胰酶会降解需抽提的目的细胞膜蛋白，可选用含EDTA但不含胰酶的细胞消化液将贴壁细胞消化下来。）加入1ml已添加PMSF的细胞膜蛋白抽提试剂A液（使PMSF的终浓度为1mM）至2000-5000万细胞中，轻轻悬浮细胞，冰水浴10-15分钟。

新鲜组织样品

1.2．称取100mg新鲜组织，用剪刀充分剪碎，加入1ml已添加PMSF的细胞膜蛋白抽提试剂A液（使PMSF的终浓度为1mM），轻轻悬浮细胞，冰水浴10-15分钟。

2．把细胞悬液或组织样品转移到预冷玻璃匀浆器中，充分匀浆研磨30-50次。

3．将样品匀浆液转移至新的EP管中， 4℃，700g离心5分钟。吸取上清至新的EP管中，千万不要触及沉淀。

4. 将收集到的上清于4℃，14,000g离心30分钟。

5．吸取上清至新的EP管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可立即使用，也可-80℃冻存。(不可接触到沉淀。)

6．将步骤5中的沉淀于4oC，14,000g离心10秒。尽量吸除上清。

7．加入细胞膜蛋白抽提试剂B液200μl，振荡器最高速剧烈涡旋5秒重悬沉淀，冰水浴5-10分钟。

8．重复步骤7的涡旋和冰水浴1-2次。4oC，14,000g离心5分钟，吸取上清至新的EP管中，即为抽提得到的细胞膜蛋白，可立即使用，也可-80℃冻存。

注意事项

1．本产品需自备PMSF或蛋白酶磷酸酶抑制剂。PMSF需在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

2．本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果差。

3．使用过程中所用到的试剂耗材都需要进行预冷处理，并在冰上或4℃进行操作。

4．本产品仅为科研专用。

5．使用时，请穿实验服、佩戴一次性口罩、手套操作。