产品描述

细胞线粒体分离试剂盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是可快速便捷地分离培养细胞线粒体的试剂盒。本试剂盒可获得高纯度的具有生理功能的线粒体，可用于线粒体生理功能方面的研究（如线粒体膜电位检测等），也可用本试剂盒中线粒体裂液裂解后用于常规的蛋白分析（如SDS-PAGE、Western、双向电泳等）。同时，本试剂盒可获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放。如果每个样品细胞数量为2000-5000万，本试剂盒可处理50-100个样品。

产品包装

运输与保存方式

      冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

使用说明

1．将悬浮培养的细胞或已用刮刀刮下的贴壁细胞及培养基一同转移至离心管中，离心收集细胞，用PBS离心洗涤细胞2次，再用PBS重悬细胞，取少量计数，剩余细胞离心收集细胞沉淀，尽量去除上清。

2．加入1-2.5ml线粒体分离试剂至2000-5000万细胞中，轻轻悬浮细胞，冰水浴10-15分钟。

3．将细胞悬液转移到一适当大小的玻璃匀浆器中，匀浆10-30下左右。

4．取2μl细胞加入30μl台盼蓝染色液，混匀后显微镜下观察台盼蓝染色阳性(蓝色)细胞的比例，如果阳性细胞比例不足50%，增加5次匀浆，再次取样进行台盼蓝染色鉴定。

5．细胞匀浆液在4℃，600g离心10分钟。尽量吸取上清，沉淀即为线粒体。

6．如果需要获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可在上一步骤中收集上清，尽量不要接触沉淀。收集得到的上清12,000g，4℃离心10分钟。

7．如果用于完整线粒体的功能或酶活性研究，可加入150-200μl线粒体储存液重悬线粒体；如果用于线粒体的蛋白研究，可加入150-200μl线粒体裂解液裂解得到蛋白；如果用于双向电泳，请使用适当的用于双向电泳的裂解液处理线粒体。

注意事项

1．如需制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF，使PMSF终浓度为1mM。PMSF需在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

2．使用线粒体储存液稀释或储存的线粒体样品应及时使用，以免线粒体膜电位受影响。如不能及时使用，可在-80oC保存。冻存后的线粒体样品不建议用于膜电位的检测，但可用线粒体蛋白或核酸的相关检测。

3．使用过程中所用到的试剂耗材都需要进行预冷处理，并在冰上或4℃进行操作。

4．台盼蓝与PMSF对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

5．本产品仅为科研专用。

6．使用时，请穿实验服、佩戴一次性口罩、手套操作。