产品名称 | 产品编号 | 规格 |
高保真酶预混液 | SYT111 | 1ml |
产品描述
高保真酶预混液是即用型2×预混合溶液,包含DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系。本产品 DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶,具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。
本高保真酶预混液具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可进行扩增,简化了实验操作步骤,减少了人为误差,提高了实验通量和结果的重复性。本产品中不含染料,PCR产物需加入Loading buffer 后进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。
使用说明
体系配置(50 μL)
组分 | 体积 | 终浓度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板 | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix | 25 μL | 1× |
1)聚合酶终浓度:在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2)引物:PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.5 μM。
3)Mg2+、dNTP终浓度:在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4)高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
5)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):
模板种类 | 扩增片段1 kb-20 kb |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序设置
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 0.5-3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec |
延伸 | 72℃ | 15-30 sec/kb |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
1)预变性温度和时间:推荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。
2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间推荐如下:质粒DNA等简单模板为15 sec/kb;cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb,根据实际情况可延长至40 sec/kb。
4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端,产物直接用于克隆,请使用平末端连接载体
注意事项
1.本产品仅作科研用途。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。