产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 |
2×PCR Master mix（with Dye） | SYT008 | 1 ml | -20℃避光 |
产品描述
本产品是经过优化的2×浓度的PCR预混液，包含有DNA 聚合酶、dNTP、MgCl2和其他稳定剂等，只需加入模板和引物即可进行扩增，产品中含有溴酚蓝染料，反应完成后可直接上样。使用本产品扩增得到的PCR产物具有 3’-dA 突出端。
适用范围
适用于 PCR 反应、菌落 PCR 鉴定、载体构建等应用。
运输与保存方式
冰袋+干冰运输。-20℃避光储存，有效期2年。
反应体系（推荐冰上配制）
组分 | 体积（μl） | 体积（μl） |
2×PCR Master mix（with Dye） | 25 | 12.5 |
Forward Primer (10 μM) | 2 | 1 |
Reverse Primer (10 μM) | 2 | 1 |
模板 DNA | X | X |
无菌超纯水 | to 50 | to 25 |
【注】：使用前请务必将产品混匀。
a) 引物浓度：寡核苷酸引物一般长度为20-40nt，理想GC含量40-60%。
b) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
c) 模板：在50μL反应体系中，植物、动物及人基因组DNA推荐的模板量为50ng-200ng，质粒DNA推荐100pg-10ng。
扩增程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 30 sec | 35 |
退火 | 50-60 ℃ | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 30-60 s/kb |
终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
保持 | 4-12℃ |
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【注】：a) 变性与退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值2-5℃。
b) 延伸时间：分子鉴定建议30 sec/kb。基因克隆建议60 sec/kb，以保证产物量达到最高。
