产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 |
2×PCR mix for PAGE（with Dye） | SYT009-1ML | 1 ml | -20℃避光 |
2×PCR mix for PAGE（with Dye） | SYT009-10ML | 10 ml | -20℃避光 |
产品描述
本产品是专门用于PCR扩增短串联重复序列而设计的PCR mix。采用了双组分DNA聚合酶（改造的T5 DNA Polymerase及只有3`-5`核酸外切酶活性的T6 DNA Polymerase），配合精心优化的buffer体系，既解决了常规Taq酶在多重复序列处扩增时产生插入/缺失突变，同时又具有高保真的优点。
本产品是2×浓度的PCR预混液，使用时只需添加模板、 引物，加水至终浓度为1×即可进行PCR扩增，反应完成后可直接上样，进行PAGE电泳检测。使用本产品扩增得到的PCR产物为平末端。
适用范围
短片段PCR扩增（<1000bp），PAGE检测。 不推荐用于长片段基因组扩增。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存，有效期2年。本产品完全融解后请于4 ℃保存，使用时需颠倒混匀。
反应体系（推荐冰上配制）
组分 | 体积（μl） | 终浓度 |
2×PCR mix for PAGE（with Dye） | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 2 | 0.4μM |
Reverse Primer (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
模板 DNA | X | ＜1ug |
无菌超纯水 | to 50 | - |
【注】： 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：寡核苷酸引物一般长度为18-25 bp，引物GC含量以 40-60%内为宜。由于本产品含有具有3'→5'外切酶活性T6 DNA Polymerase，引物终浓度0.4 μM为宜。。
b) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序
步骤 | 温度 | 时间 |
预变性 | 98℃ | 2-3 min |
变性 | 98℃ | 10 sec |
退火 | Tm±2 ℃ | 10 sec |
延伸 | 72℃ | 5-15 s/kb |
终延伸 | 72℃ | 2min |
保持 | 4-10℃ |
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【注】：a) 变性与退火温度：预变性及变性建议采用98℃，预变性时间2min即可，变性10s可满足大部分反应要求。退火温度的设定要依据引物 对的Tm值，采用Tm±5 ℃范围内温度进行退火可获得理想效果。
b) 延伸时间：延伸时间根据目的产物大小设定，通常以10s/kb设定即可获得良好的扩增产量。对于含扩增抑制物、难扩增模板、或需更高的产量等PCR应用，可按10-30s/kb设定延伸时间。
