产品名称 | 产品编号 | 规格 |
Quant 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA digester plus) | SYT-012-2 | 100 T |
产品描述 |
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Quant 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA digester plus)是基于 Quant Reverse Transcriptase 而开发，能高效合成第一链cDNA 合成试剂盒（含去基因组）。
1、该酶热稳定性大幅度提高，可耐受高达 50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA 模板的逆转录。
2、该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
3、扩增片段≤10 kb 。
4、去除 RNA 模板中残留的基因组DNA 污染，保证后续结果更加可靠。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号（规格） SYT-012-2 (100 T) |
SYT012-A | RNase free ddH2O | 1 mL×2 |
SYT012-B | 5×gDNA digester Buffer | 200 μL |
SYT012-C | gDNA digester | 100 μL |
SYT012-D | 2×Quant Synthesis Mix | 1 mL |
【注】：1）2×Quant Synthesis Mix包含RNase inhibitor。
运输与保存方式
干冰运输。-20℃保存，有效期 18 个月。
注意事项
1） gDNA digester 和 2×Quant Synthesis Mix 含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心，吹打混匀。
2） 建议 RNA 是溶于水而不是TE Buffer 中，因为 TE Buffe 会干扰 gDNA 去除以及逆转录反应。
3） 可不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Quant 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No. SYT-002) 效果一致。但是请勿将 gDNA digester 与 SYT-002 中的 2×Quant Synthesis Mix 配套使用，因其不含终止gDNA digester 反应的成分，会影响反转录和后续的 qPCR 实验。
4） 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免 RNase 污染。
5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第一链 cDNA 合成操作步骤
1、在RNase free 离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育 2 min
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 10 μL |
5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
gDNA digester | 1 μL |
Total RNA | 1 ng -5 μg* |
or mRNA | 1 ng-500 ng* |
【注】：* 若后续实验为 qPCR，Total RNA 投入量为 1 ng -1 μg；mRNA 的投入量为 1 ng-100 ng。若基因的表达丰度很低， 最多可投入 5 ug Total RNA 或 500 ng mRNA。
2、逆转录反应体系配制（20 μL 体系）
组分 | 使用量 |
上一步的反应液 | 10 μL |
2×Quant Synthesis Mix | 10 μL |
3、逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：逆转录温度：推荐使用 42℃。对于高 GC 含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到 50℃。
1. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
