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Quant TaqTM qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)荧光定量预混液
所属系列 : 分子系列> qPCR系列 
产品货号 : SYT102
产品储存 : -20℃避光
产品规格 : 5×1 ml
产品价格 : 598元
  产品介绍:

产品名称

产品编号

规格

储存

Quant TaqTM qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)

Quant TaqTM qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)

SYT102S

SYT102

1 ml

5×1 ml

-20℃避光

-20℃避光

产品描述

SYBR Green I是一种结合于双链DNA(double-strand DNA, dsDNA)双螺旋小沟区域的绿色荧光染料。SYBR Green I在游离状态下的荧光比较微弱,一旦与双链DNA结合后,其荧光会大大增强。通过检测荧光强弱就可以定量检测PCR过程中扩增产生的双链DNA的数量。

Quant TaqTM qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox) 实时定量 PCR 扩增的预混合溶液。Mix 中含有热启动DNA PolymeraseSYBR Green IdNTPsMg2+Low Rox。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量 PCR,大大简化操作过程,降低污染几率。

本品采用的DNA 聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升PCR 反应扩增效率的因子,使定量 PCR 可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

适用机型

 

 

 

使用No ROX 仪器机型

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; MiniOpticon™,

Cepheid SmartCycler®;

Eppendorf Mastercycler® eprealplex, realplex 2s;

Illumina Eco™ qPCR;

Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;

Roche: LightCycler® 480, 96, Nano, 1.5/2.0**;

Thermo Scientific PikoReal Cycler.

 

使用Low ROX仪器机型

Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiA™7,

QuantStudio 6 and 7 Flex System, QuantStudio 3 and 5;

Agilent Stratagene: MX4000™, MX3005P™, MX3000P™.

使用High ROX仪器机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne™, StepOne Plus™.

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存,有效期 18 个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料 SYBR Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

注意事项

1、. 解冻后Master Mix 可能出现絮状物质,4℃放置并上下颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。

2.、 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系(推荐冰上配制)

使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

引物浓度:通常引物终浓度为 0.2 μM,也可以根据情况在

0.1-1.0 μM 之间进行调整。

模板浓度:如模板类型为未稀释 cDNA 原液,使用体积不应超过 qPCR 反应总体积的 1/10

模板稀释cDNA 原液建议 5-10 倍稀释,最佳模板加入量以扩增得到的 CT 值在 20-30 个循环为好。

反应体系:推荐使用 20μl 50μl,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

组分 体积( μl 体积( μl 终浓度

Quant Taq TM qPCR SYBR Green Master Mix ( L o w Rox)

10

25

Forward Primer (10 μM)

0.4

1

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.4

1

0.2 μM

模板 DNA

X

X

-

无菌超纯水

to 20

to 50

-

 

SYT102-1.jpg

a) 预变性时间:根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至 2 min

b)退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。

c)荧光信号采集(:请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

30sec 以上:Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 FastRoche Applied Science: LightCycler 480Bio-Rad:

CFX96

31sec 以上:Applied Biosystems: 7300

34sec 以上:Applied Biosystems: 7500

d) 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

常见问题及改进

问题

可能的原因

建议改进

问题

可能的原因

建议改进

 

阴性对照中出现明显的扩增结果

所使用的试剂或去离子水被污染

更换新的试剂及去离子水并保证在洁净的实验台上进行试验

 

 

 

 

 

无扩增曲线

循环数不足

循环数一般设为40

引物二聚体

35个循环之后阴性对照出现明显扩增是正常的,应该结合溶解曲线进行分

循环程序中不存在信号收集程序

两步法中信号收集是设定在退火和延伸步骤;三步法中信号收集应该

设定在72℃延伸步骤

 

 

 

Ct值明显过高或过低

低扩增效率

优化反应体系,尝试三步法或重新设

计引物

引物降解

长期储存后应该通过PAGE胶确定引物的完整性

模板浓度太低

增大模板浓度

模板发生降解

制备新鲜的模板

模板浓度太低

降低稀释比对于未知表达情况的目的基因,首次检测采用模板原 液)

扩增片段太长

增 片 段 的 长 度 建 议 为100-

200 bp

反应体系中存在PCR 抑制物

抑制物往往由于模板的加入而引入, 可以稀释模板或者重新制备模板

模板降解

制备新鲜模板

 

 

 

 

 

扩增曲线形状异常

扩增曲线形状异常

信号较弱时系统的校正会导致此结果,可以通过提高模板浓度改进

 

 

 

溶解曲线杂峰

引物设计不合理

引物二聚体的杂峰常出现在75℃ 左右,如该峰值显著, 需要重新

设计引物

引物浓度过高

适当降低引物浓度

断裂或下降的扩增曲线

模板浓度太高,基线的终点值高于Ct 值,可以减小基线的终点值(Ct值- 4)并且重新分析数据

模板浓度过低

适当增加模板浓度

基因组DNA污染

跨内含子设计引物

扩增曲线突然下降

反应体系中存在气泡并且在温度升高的时候突然破掉, 设备会探测到突然的荧光值下降,可以离心并检查是否存在气泡

 

 

复孔稳定性差

加样误差

增大反应体系;增加模板稀释倍数,同时提高加样体积

模板浓度过低

提高加样量

仪器问题

仪器各孔之间温度有差异, 需校

准仪器后使用



 
 
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